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      使用DNaseI的注意事項有這幾點
      發布時間:2022-04-25 點擊量:62
         DNaseI是脫氧核糖核酸酶I。它從純化得到是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA產生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的核酸內切酶。水解單鏈或雙鏈DNA后的產物,5'端為磷酸基團,3'端為羥基。其活性依賴于鈣離子,并能被鎂離子或二價錳離子激活。鎂離子存在條件下,可隨機剪切雙鏈DNA的任意位點;二價錳離子存在條件下,可在同一位點剪切DNA雙鏈,形成平末端,或1-2個核苷酸突出的粘末端。
       
        DNaseI的注意事項:
        1、重復冷凍/融化循環可使抗體變性,導致其形成使抗體結合能力降低的聚集物。保存于-20℃對于大多數抗體是適當的;保存于-80℃無明顯優勢。冰箱不能為無霜型。這些冷凍和融化之間的循環(以減少結霜)恰恰是應該避免的。
       
        2、抗體試劑瓶應置于具有較小溫度波動的冰箱區域,例如朝冰箱后部放置而不是置于門架上。有些研究人員加入冷凍保護劑甘油達到50%的終濃度以防止冷凍/融化損傷;甘油可將凝固點降低至低于-20℃。雖然這對于很多抗體是可接受的,但是只有一小部分提供的抗體測試了在該保存條件下的穩定性,并且保證僅使用于按數據表上推薦的方式保存的抗體。不建議將包含甘油的溶液保存于-80℃,因為該溫度低于甘油的凝固點。請注意甘油可被細菌污染,如果加入甘油或任何冷凍保護劑,則應當小心操作,以得到無菌制備物。
       
        3、應避免抗體在稀釋至工作濃度后在4℃下保存超過一天。蛋白質在高濃度下保存時一般不易降解,理想的濃度為更高。這是在抗體溶液中加入蛋白質例如BSA作為穩定劑的理論基礎。加入的蛋白質也有助于減少抗體因結合于容器壁上而造成的損失。對于打算進行偶聯的抗體而言,由于穩定蛋白質會與抗體競爭,降低了偶聯的效率,所以不應加入穩定蛋白質。
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