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      RNA提取使用正確的細胞或組織儲存條件
      發布時間:2021-04-19 點擊量:430
         RNA提取利用硅膠膜特異性吸附原理實現核酸分離,即根據緩沖液體系的鹽離子濃度和PH值與柱子上的Si基質(樹脂)結合RNA的方式綁定RNA,其優點在于重復性好、回收率高且操作簡便。
       
        RNA提取使用正確的細胞或組織儲存條件:
        在樣品用液氮瞬間凍結之后,應該儲存在°C凍。即使是置于含有胍鹽的裂解液中作勻漿前的短暫解凍,也會損失。瞬間凍結的組織應該首先在超低溫條件下先研磨成粉,行勻漿。RNAfixer使樣品儲存更為便利。儲存在RNAfixer中的細胞保存長達1個星期,在4°C可穩定保存長達1個月,或長期。
       
        消除環境RNase污染
        為了得到,在整個RNA制備過程中,當RNA離開強蛋白變性劑(如離液裂解避免引入新的RNase污染就非常關鍵。由于RNase幾乎是無所不以純化的RNA接觸的每一樣東西都是無RNase污染的。所有的表面,液工臺、玻璃器皿和制膠設備,都必須用表面去污凈化溶液如RNase噴霧清去除各種溶液或者反應緩沖液中可能存在的RNase污染,可以用RNAsafe。一直使用無RNase的槍頭、試管和溶液,手套也應經常更換。
       
        RNA提取的注意事項:
        1.異丙醇、乙醇都應用未開封的,75%的乙醇用移液槍配制,勿用量筒等中間器皿。
       
        2.整個過程要及時更換手套,戴雙層口罩,并在操作區開啟酒精燈。
       
        3.RNA一定要貯存到-70℃冰箱,在-20℃保存時間很短。
       
        4.配制的溶液應用滅菌處理的DEPC水。
       
        5.移液器:RNase的又一污染源是移液器。根據移液器制造商的要求對移液器進行處理。一般情況下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗移液器的內部和外部,基本達到要求。
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